Обычная колоночная хроматография
2. Хроматографический столбец (тип вращения)
3. Хроматографический столбец (Руководство)
*** Прайс -лист для целого выше, спросите нас, чтобы получить
Описание
Технические параметры
Обычная колоночная хроматографияИспользует разницу в коэффициентах распределения различных веществ между стационарной фазой и подвижной фазой, или различные способности удержания фиксированных фаз относительно различных веществ, чтобы достичь разделения веществ. Когда смесь протекает через хроматографическую колонку с подвижной фазой, она будет взаимодействовать со стационарной фазой в колонке (например, растворение, адсорбция и т. Д.). Из -за различий в физических и химических свойствах и структурах каждого компонента в смеси, величина и прочность их взаимодействия со стационарной фазой также различаются. При одной и той же движущей силе время удержания каждого компонента в стационарной фазе различено, так что компоненты в смеси текут из столбца в определенном порядке, достигая разделения.
Параметр
Обнаружение остатков пестицидов
 |
 |
 |
 |
Мы часто говорим, чтоОбычная колоночная хроматографияНа самом деле разделение колонки хроматографии, также известное как колонка -хроматография. Впервые он был изобретен и использован русскими учеными в 1903 году. Он раздавил раствор пигментов растений в порошок карбоната кальция и обнаружил различные цветовые полосы на порошке карбоната кальция сверху вниз. Были получены разделение и извлечение различных цветовых полос, был получен относительно чистый хлорофилл, лютеин и т. Д.
После ста лет развития этот метод стал относительно зрелым, и стационарная фаза также развивалась от одного порошка карбоната кальция до глинозем (который можно разделить на кислый, нейтральный, щелочный), силикагель, активированный углерод и т. Д. Среди них силикагель является наиболее часто используемым в крупных лабораториях, в целом делится на нормальный фазовый силика и обратный фазовый муж!
Стационарная фаза (силикагель), как правило, должна быть очищена и активирована, а размер частиц должен быть равномерным. Теоретически, чем меньше размер частиц и тем больше площадь поверхности на единицу массы, тем выше адсорбционная способность и тем лучше эффект разделения.
Тем не менее, при практическом использовании, когда частицы с фиксированной фазой слишком малы, часто существует две ситуации: одна из них заключается в том, что они легче по весу и легко плавают в воздухе (силикагель не может быть разлагается человеческим организмом, и чем лучше, тем токсичнее он); Во -вторых, мелкие частицы также могут привести к небольшим зазорам между частицами, что приводит к медленной скорости потока растворителя и потреблению времени; Принимая силикон в качестве примера, самый большой коммерчески используемый размер силикона в настоящее время 200-300.
С точки зрения методов прохождения столбцов, в дополнение к оборудованию автоматического анализа, такого как подготовка прямого циркуляции, эффективная подготовка жидкости и машины прохождения столбцов, упомянутые ранее, передача ручного столбца в основном делится на три типа: прохождение столбца атмосферного давления, прохождение колонки депрессии и пропуск столбца давления.
Среди них депрессоризация через колонку приводит к плохой эффективности адсорбции из -за быстрой скорости потока элюента, что приводит к потере большей части количества лотков и плохой эффективности разделения. Он подходит для разделения образцов с относительно открытыми пластинами TLC, особенно для образцов только с одной большой полярной примесей в продукте; Большая часть его времени тратится на предварительное лечение соединений, удаляя некоторые примеси перед тщательной очисткой. Следует отметить, что испарение растворителя, вызванное отрицательным давлением во время использования, может привести к конденсации большого количества капель воды на внешней поверхности колонны. Соединенные соединения, чувствительные к воде, не должны быть легко предприняты.
Прохождение столбца атмосферного давления является наиболее эффективным методом разделения среди трех, но поскольку растворитель часто движется слишком медленно, даже лучший эффект разделения может повлиять на эффективность. Следовательно, в это время обычно оказывается давление, которое называется прохождением столбца под давлением; Но давление не должно быть слишком высоким. Как правило, для автоматической работы используется двойная цепная шар, а для автоматической работы используется рыбный насос. Оба могут быть изменены, как показано на картинке.
Обычный процесс пересечения столбцов:
Подготовительная работа должна быть сделана хорошо:
При выборе столбца наблюдайте, есть ли шлифовальная доска. Для колонн без шлифовальных плат, не забудьте заполнить дно хлопком. Хлопок не должен быть слишком толстым или слишком тонким, если он может заблокировать силикон от выхода. (Блогер прямо разобрал вешалку для одежды и использовал ее для вставки хлопка в розетку на вилке)
Подготовьте минимальную полярность Eluent, ультрафиолетовую лампу (рекомендуется для лабораторного персонала, портативных, готовых сделать фотографию в любое время), оборудование для давления и стойку для тестовой трубы!
Выберите подходящую колонку, добавьте силиконовый гель, замочите силиконовый гель и выравнивайте ее
ВыборОбычная колоночная хроматографияочень важно, и их размер должен быть рассчитан на основе количества продукта, который обычно можно разделить на:
Несколько миллиграммов колонки (окончательный выбор для общего синтеза);
Колонна из нескольких десятков миллиграммов (методологический субстрат экспансии);
От 500 миллиграммов до 1 грамма колонны (используя методологию в качестве сырья);
Столпы около 5 г и большие весы.
Наиболее распространенное соотношение диаметра колонны к высоте в лаборатории, как правило, между 1: 2,5 и 1:15. Количество силикагеля, используемого в качестве стационарной фазы во время загрузки образца, примерно в 20-40 раз больше, чем у образца. Стандарт для выбора столбцов должен основываться на ситуации восхождения на плиту TLC в вашем образце. Если в непосредственной близости есть много примесей, попробуйте выбрать большую колонку как можно больше, чтобы ваш образец был покрыт небольшим тонким слоем (рекомендуемая толщина ниже 5 мм). Если примеси находятся далеко, эта толщина может быть естественным образом увеличиваться, но не рекомендуется, чтобы толщина вашего образца превышала 2 см, если только продукт не промывается.
Многие люди ошибаются, думая, что добавление большего количества силикона, даже если он толще в моем образце, может ли он быть хорошо разделенным? Этот ответ отрицательный!
Причина в том, что эти люди никогда не думали, что образцы ниже и выше не работали по той же линии, поэтому они могли получить только некоторые чистые, большинство из которых были пересекаются, не говоря уже о нечистых, тратя время и растворители!
Вот почему образец требует истончения!
После выбора колонны добавление силикона можно сделать с помощью воронки кормления. В то же время, обязательно наденьте маску и работайте в капюшоне. Причина этого не будет разработана блоггером (силикоз).
Что касается инфильтрации силикагеля, рекомендуемый процесс: сначала поместите колонку из силикагеля с установленным вертикальным силикагелемом, выравнивайте поверхность силикагеля рукой, подключите дно колонки из силикагеля к водяному насосу, накачивает силикагель и затем налейте наименьшую полярную элюна. Когда элюент собирается просочиться, закройте отключенный клапан, чтобы предотвратить закачивание растворителя в водяной насос.
Затем под давлением силиконовый гель может быть равномерно пропитана путем промывки семи или восьми томов колонны с наименьшим количеством развивающегося агента.
Образец выше
Отбор проб делится на мокрый отбор и сухой выборки.
(1) Влажная выборка.
Рекомендуемый метод состоит в том, чтобы использовать пипетку с резиновым наконечником для сосания образца, близко к верхней части силиконового геля, медленно и равномерно капать образец, пока он не покрывает слой, затем прекратите добавлять образец и приложить некоторое давление, чтобы погрузить маслянистую вещество в слой силиконового геля; Погрузите маслянистую вещество в силиконовый слой и повторяйте этот процесс несколько раз, пока все образцы не будут загружены!
Некоторые новые студенты могут быть любопытны, почему эта операция выполняется вместо того, чтобы покрывать масло, как вещество, сразу же?
Фактически, эта операция может снизить эффективную высоту слоя образца. На этом этапе колонка уже началась, а последующие образцы похожи на растворители, подталкивающие предыдущие образцы к адсорб и десорб в силикагеле.
(2) Что касается сухой выборки.
Если это абсолютно необходимо, это не рекомендуется. Сплошные образцы более рекомендуются быть избитыми или кристаллизованными. «Ноблезные методы, этилацетат против воды, рекомендуется кристаллизация ультразвуковых колебаний кристаллизация масла с высоким кипением» и «разделение метода лабораторной перекристаллизации».
Сухой выборка обычно приносит две проблемы; С одной стороны, во время процесса смешивания образца возможность реакции между образцом и силикагелем увеличивается из -за необходимости повышения температуры для поворотного испарения; С другой стороны, сухая нагрузка означает, что адсорбенты будут введены в слой образца, увеличивая высоту слоя образца или размер колонны, требуя большего времени и большего растворителя.
Если нет другого выбора, просто медленно налейте адсорбированный порошок в колонку для нагрузки, с некоторыми требованиями, аналогичными мокрым методам.
Добавить безводную сульфат натрия или кварцевый песок
Чтобы избежать воздействия на слой образца во время добавления элюента, вызывая неравномерность, деформацию и воздействие на эффективность разделения, слой безводного сульфата натрия или кварцевого песка обычно прокладывается поверх слоя образца.
Наши инженеры лично предпочитают укладывать безводную сульфат натрия, потому что он также имеет функцию сушки и дружелюбно к растворителям, таким как дихлорметан, которые подвержены улетущению, поглощению тепла и конденсации!
Градиент элюирование, выборка и сбор
После загрузки сначала промыть столбец небольшим полярным растворителем (растворитель, который не позволяет продукту проходить через) для 2-3 тома столбца (один объем столбца определяется как объем мобильной фазы, текущий в и наружу), чтобы обеспечить однородность, а затем выберите пропорцию для элиции.
Как выбрать элюент, который проходит через колонку?
Соотношение Eluent - это отношение, когда ваш продукт достигает значения RF примерно 0. 2 на пластине TLC
Это опыт промывки колонн, который я прочитал много книг и общих, и фактический процесс также очень похож. Лично я предпочитаю уменьшить градиент на два раза.
Например, если растворитель для восхождения на табличку TLC - это PE/EA =2: 1, блогер с большей вероятностью запустит градиент элюирование из PE/EA =4: 1 и заканчиваться в PE/EA =2: 1, как правило, приводятся к лучшим результатам.
Есть также методы при сборе Eluent. Сначала вы можете выбрать более крупную пробирку для получения ее, и когда TLC приближается к целевой точке, переключитесь на меньшую пробирку. Это может уменьшить возможность получения большего и избежать примесей.
Если вы сталкиваетесь с ситуациями, когда точки примесей и точки продукта находятся близко друг к другу, особенно с слабой флуоресценцией, помните, чтобы не оказывать давление. Вместо этого выберите пропустить столбец под нормальным давлением и меняйте трубку каждый раз, когда подключается половина или менее трубки, что также может увеличить вероятность очистки.
Помните, чтобы не обращаться к столбу своевременно!
Многие люди имеют привычку предполагать, что колонка была передана и высушена, когда в одной или двух трубках нет продукта после TLC на более поздней стадии.
Я понял, что урожайность была слишком низкой, когда я рассчитывал его, или когда я пошел, чтобы сделать спектр, я обнаружил, что спектр был неверным и упустил неправильную точку. Я глубоко сожалел об этом.
Таким образом, рекомендуется не спешить обрабатывать столбец после завершения желаемой точки. Вместо этого выполните ядерный магнитный резонанс, чтобы соответствовать выходу перед обработкой.
Если вы заняты или спешите очищать другие соединения с этимОбычная колоночная хроматографияРекомендуется промыть с помощью доброкачественного смешанного растворителя с высокой полярностью и оставить эту часть элюента отдельно для результатов идентификации.
горячая этикетка : Обычная колоночная хроматография, Китай Традиционные колонны производители хроматографии, поставщики, фабрика
Предыдущая статья
Маленькая хроматографическая колонкаСледующая статья
Классическая колоночная хроматографияОтправить запрос
